苯巴比妥是一种广泛用于动物镇静、麻醉和安乐死的药物。在饲料中，苯巴比妥的含量需要得到准确测定，以保证动物的健康和安全。本标准提供了一种高效液相色谱法来测定饲料中苯巴比妥的含量。

1.范围
本标准适用于饲料中苯巴比妥的测定。

2.引用标准
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价标准
GB/T 20364-2006 饲料中异戊巴比妥的测定
GB/T 20365-2006 饲料中硝基呋喃的测定
GB/T 20366-2006 饲料中硝基甲酚的测定
GB/T 20367-2006 饲料中硝基苯的测定

3.原理
将饲料样品经过提取、净化、浓缩后，用高效液相色谱法进行分析。在特定的条件下，苯巴比妥在高效液相色谱柱中与流动相发生相互作用，从而实现苯巴比妥的分离和测定。

4.仪器和设备
- 高效液相色谱仪
- 恒温振荡器
- 离心机
- 电子天平
- 称量瓶
- 称量纸
- 注射器
- 过滤器
- 紫外可见分光光度计

5.试剂和材料
- 苯巴比妥标准品
- 甲醇
- 乙腈
- 磷酸二氢钾
- 磷酸氢二钠
- 氯仿
- 硫酸钠
- 氢氧化钠
- 氯化钠
- 纯水

6.操作步骤
1.取适量饲料样品，粉碎并混匀。
2.称取0.5g样品，加入50mL甲醇，用恒温振荡器摇匀提取30min。
3.离心10min，取上清液过滤。
4.取上清液10mL，加入10mL乙腈，用恒温振荡器摇匀提取30min。
5.离心10min，取上清液过滤。
6.取上清液2mL，加入0.1mol/L磷酸二氢钾溶液0.5mL，用氯仿萃取3次，每次离心10min，取上清液合并。
7.取上清液1mL，加入硫酸钠0.5g，氢氧化钠0.5g，氯化钠0.5g，用氯仿萃取3次，每次离心10min，取上清液合并。
8.取上清液1mL，加入磷酸氢二钠0.5g，用氯仿萃取3次，每次离心10min，取上清液合并。
9.取上清液1mL，加入甲醇0.5mL，用过滤器过滤。
10.取上清液1mL，注入高效液相色谱仪进行分析。

7.结果计算
用高效液相色谱法测定苯巴比妥的峰面积，根据标准曲线计算出苯巴比妥的含量。

8.精密度和准确度
本方法的相对标准偏差不大于5%。

9.质量控制
在每个批次的样品中加入苯巴比妥标准品，进行回收率的测定。回收率应在80%~120%之间。

相关标准
GB/T 20364-2006 饲料中异戊巴比妥的测定
GB/T 20365-2006 饲料中硝基呋喃的测定
GB/T 20366-2006 饲料中硝基甲酚的测定
GB/T 20367-2006 饲料中硝基苯的测定
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价标准