已烯雌酚是一种内源性激素,也是一种外源性激素,广泛存在于环境中。已烯雌酚对人体健康有一定的危害,因此对已烯雌酚的检测越来越受到重视。本标准规定了鸡组织中已烯雌酚残留的测定方法,采用高效液相色谱-电化学检测器法。
1. 原理
将样品经提取、净化后,采用高效液相色谱-电化学检测器法进行测定。样品中的已烯雌酚在电化学检测器中发生氧化还原反应,产生电流信号,根据电流信号的大小计算出样品中已烯雌酚的含量。
2. 试剂和材料
2.1 乙腈:色谱纯。
2.2 氯仿:色谱纯。
2.3 硅胶:分子筛。
2.4 氯化钠:分析纯。
2.5 磷酸二氢钾:分析纯。
2.6 磷酸三氢钠:分析纯。
2.7 已烯雌酚标准品:纯度≥98%。
2.8 水:去离子水。
3. 仪器设备
3.1 高效液相色谱仪。
3.2 电化学检测器。
3.3 恒温振荡器。
3.4 离心机。
3.5pH计。
4. 样品的处理
4.1 取样:取鸡组织样品,去除骨头和皮肉,切成小块,称取适量样品。
4.2 提取:将样品加入磷酸二氢钾-氯仿-乙腈混合溶液中,振荡提取,离心分离,取上清液。
4.3 净化:将上清液通过硅胶柱进行净化。
4.4 浓缩:将净化后的样品用氮气吹干,加入适量的乙腈,恒温振荡浓缩至一定体积。
5. 操作步骤
5.1 仪器预热:开机预热,调节流速和电化学检测器参数。
5.2 样品进样:将样品注入高效液相色谱仪中。
5.3 分离:采用高效液相色谱进行分离。
5.4 检测:采用电化学检测器进行检测。
5.5 数据处理:根据电流信号的大小计算出样品中已烯雌酚的含量。
6. 结果计算
6.1 已烯雌酚标准曲线:取不同浓度的已烯雌酚标准品,按照上述方法进行测定,绘制标准曲线。
6.2 样品含量计算:根据样品检测结果和标准曲线计算出样品中已烯雌酚的含量。
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