预混料是一种混合了多种饲料原料和添加剂的饲料，其中氯化胆碱是一种常用的添加剂。氯化胆碱可以促进动物的生长和发育，提高动物的免疫力和抗病能力，因此在预混料中的含量需要进行测定。本标准规定了预混料中氯化胆碱的测定方法，以保证预混料的质量和安全。

1.范围
本标准适用于预混料中氯化胆碱的测定。

2.仪器和试剂
2.1 仪器
- 恒温水浴器
- 离心机
- 紫外分光光度计
- 电子天平

2.2 试剂
- 氯化胆碱标准品
- 硫酸
- 硝酸
- 氢氧化钠
- 乙醇
- 氯仿

3.样品的制备
将预混料样品取1g，加入50ml的乙醇-氯仿（1:1）混合液中，振荡10min，离心10min，取上清液过滤，取滤液10ml，加入50ml的乙醇-氯仿（1:1）混合液中，振荡10min，离心10min，取上清液过滤，取滤液10ml，即为样品液。

4.测定步骤
4.1 制备标准曲线
取氯化胆碱标准品0.1g，加入50ml的乙醇-氯仿（1:1）混合液中，振荡10min，离心10min，取上清液过滤，取滤液10ml，用乙醇-氯仿（1:1）混合液稀释，得到氯化胆碱的不同浓度的标准溶液。用紫外分光光度计测定吸光度，制备标准曲线。

4.2 测定样品
取样品液2ml，加入10ml的硫酸-硝酸（3:1）混合液中，加热至沸腾，冷却后加入10ml的氢氧化钠溶液，用乙醇-氯仿（1:1）混合液提取，离心10min，取上清液过滤，取滤液2ml，用紫外分光光度计测定吸光度，根据标准曲线计算样品中氯化胆碱的含量。

5.计算
样品中氯化胆碱的含量（mg/kg）=（样品吸光度-空白吸光度）×标准曲线斜率×稀释倍数×1000/样品质量

相关标准
GB/T 6432-2018 饲料中氯化胆碱的测定
GB/T 6433-2018 饲料中甜菜碱的测定
GB/T 6434-2018 饲料中维生素B12的测定
GB/T 6435-2018 饲料中维生素E的测定
GB/T 6436-2018 饲料中维生素K3的测定