维吉尼亚霉素是一种广泛应用于畜禽饲料中的抗生素，但其过量使用会对人体健康产生危害。因此，对饲料中维吉尼亚霉素的测定显得尤为重要。本标准采用高效液相色谱法进行测定，具有灵敏度高、准确度高、重现性好等优点。

1. 原理
将饲料样品经提取、净化后，采用高效液相色谱法进行测定。样品中的维吉尼亚霉素在特定条件下与反相色谱柱中的固定相发生相互作用，通过梯度洗脱和检测器检测，得到维吉尼亚霉素的峰面积，进而计算出维吉尼亚霉素的含量。

2. 仪器和设备
（1）高效液相色谱仪
（2）色谱柱：C18反相色谱柱
（3）检测器：紫外检测器
（4）移液器、瓶塞、滤膜等

3. 试剂和材料
（1）甲醇、乙腈、乙酸、乙酸钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠等
（2）维吉尼亚霉素标准品

4. 操作步骤
（1）样品制备：取适量饲料样品，粉碎后称取1g，加入50ml甲醇-乙腈（1:1）混合溶液中，超声提取30min，离心后取上清液，再用0.22μm滤膜过滤，即得样品提取液。
（2）色谱条件设置：色谱柱为C18反相色谱柱，流动相为甲醇-水（含0.1%乙酸）梯度洗脱，检测波长为280nm。
（3）标准曲线绘制：取维吉尼亚霉素标准品，按一定浓度系列稀释，分别进行测定，绘制标准曲线。
（4）样品测定：取适量样品提取液，按照色谱条件进行测定，得到维吉尼亚霉素的峰面积，根据标准曲线计算出维吉尼亚霉素的含量。

5. 结果计算
维吉尼亚霉素的含量（mg/kg）=（样品中维吉尼亚霉素的峰面积/标准品中维吉尼亚霉素的峰面积）×标准品中维吉尼亚霉素的浓度×稀释倍数×提取液的体积/样品的质量

6. 精密度和准确度
本方法的相对标准偏差（RSD）不大于10%，回收率在80%~120%之间。

相关标准
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