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氨苄青霉素是一种广泛应用于畜禽养殖中的抗生素，但其过量使用会对人体健康产生潜在危害。因此，对饲料中氨苄青霉素的测定显得尤为重要。本标准采用高效液相色谱法进行测定，具有准确、快速、灵敏等优点。

1. 原理
将样品中的氨苄青霉素提取出来，经过净化处理后，采用高效液相色谱法进行分离和检测。在特定的条件下，氨苄青霉素与色谱柱中的固定相发生相互作用，从而实现分离和检测。

2. 仪器和设备
（1）高效液相色谱仪
（2）色谱柱：C18色谱柱
（3）移液器、量筒、瓶塞、滤膜等

3. 试剂和材料
（1）氨苄青霉素标准品
（2）甲醇、乙腈、乙酸、乙酸钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠等

4. 操作步骤
（1）样品制备：将饲料样品粉碎，称取适量样品，加入适量甲醇和乙酸，振荡混合，离心沉淀，取上清液过滤。
（2）提取：将上清液加入适量乙腈，振荡混合，离心沉淀，取上清液过滤。
（3）净化：将上清液加入适量磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠等，振荡混合，离心沉淀，取上清液过滤。
（4）色谱条件：色谱柱为C18色谱柱，流动相为甲醇-水（70:30），检测波长为254nm。
（5）定量：将样品注入高效液相色谱仪，根据氨苄青霉素标准品的峰面积进行定量。

5. 结果计算
样品中氨苄青霉素的含量，按下式计算：
C=（A×C0）/A0
其中，C为样品中氨苄青霉素的含量（mg/kg），A为样品中氨苄青霉素的峰面积，C0为氨苄青霉素标准品的浓度（mg/mL），A0为氨苄青霉素标准品的峰面积。

相关标准：
GB/T 23384-2009 饲料中四环素类药物的测定 高效液相色谱法
GB/T 23386-2009 饲料中磺胺类药物的测定 高效液相色谱法
GB/T 23387-2009 饲料中氯霉素的测定 高效液相色谱法
GB/T 23388-2009 饲料中链霉素的测定 高效液相色谱法
GB/T 23389-2009 饲料中土霉素的测定 高效液相色谱法