一、范围
本标准适用于饲料中游离刀豆氨酸的测定。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室水质规范及评价准则
GB/T 6688 分析化学实验室安全规程
GB/T 20394 饲料中氨基酸的测定 高效液相色谱法
GB/T 23736 饲料中游离赖氨酸的测定 离子交换色谱法

三、定义
3.1 游离刀豆氨酸
指饲料中未与其他氨基酸结合的刀豆氨酸。

3.2 标准品
指已知浓度的游离刀豆氨酸溶液。

3.3 样品
指待测饲料样品。

四、原理
样品经水解后，游离刀豆氨酸与离子交换树脂上的离子交换，游离刀豆氨酸从树脂上洗脱，经过检测器检测，根据峰面积计算游离刀豆氨酸的含量。

五、仪器设备
5.1 离子交换色谱仪
5.2 色谱柱：离子交换树脂柱
5.3 检测器：紫外检测器
5.4 称量仪
5.5 恒温水浴器
5.6 超声波清洗仪

六、试剂和材料
6.1 甲醇
6.2 乙腈
6.3 离子交换树脂
6.4 游离刀豆氨酸标准品
6.5 氢氧化钠
6.6 氯化钠
6.7 硫酸
6.8 氢氯酸
6.9 水

七、操作步骤
7.1 样品制备
取适量样品，粉碎并过筛，称取0.5g样品，加入10mL 6mol/L氢氧化钠溶液，放入恒温水浴器中加热水解2h，冷却后加入10mL 6mol/L盐酸溶液中和，加水定容至50mL，过滤，取滤液作为样品。

7.2 色谱条件
色谱柱：离子交换树脂柱
流动相：甲醇-乙腈-水（10:10:80）
流速：1.0mL/min
检测器：紫外检测器
检测波长：254nm
柱温：30℃

7.3 样品检测
取适量样品，过滤后注入色谱仪，按照色谱条件进行检测，记录游离刀豆氨酸的峰面积。

7.4 标准曲线的绘制
取游离刀豆氨酸标准品，分别加入离子交换树脂中，按照色谱条件进行检测，记录游离刀豆氨酸的峰面积，绘制标准曲线。

7.5 含量计算
根据样品的峰面积和标准曲线计算游离刀豆氨酸的含量。

八、结果表示
游离刀豆氨酸的含量，以g/kg表示，精确到0.001g/kg。

九、质量控制
9.1 标准品的制备和保存应符合相关标准的要求。
9.2 样品的制备和检测应符合相关标准的要求。
9.3 每个样品应进行两次测定，结果的相对标准偏差不得大于5%。

十、报告内容
报告应包括以下内容：
10.1 样品的名称、编号、重量等信息。
10.2 游离刀豆氨酸的含量及相对标准偏差。
10.3 检测方法的名称、日期、检测人员等信息。

相关标准
GB/T 6682 分析化学实验室水质规范及评价准则
GB/T 6688 分析化学实验室安全规程
GB/T 20394 饲料中氨基酸的测定 高效液相色谱法
GB/T 23736 饲料中游离赖氨酸的测定 离子交换色谱法
GB/T 6437 饲料中氨基酸的测定方法