一、范围
本标准规定了饲料中喹乙醇的高效液相色谱法测定方法。

本标准适用于饲料中喹乙醇的测定。

二、引用文件
GB/T 601-2002 饲料中水分的测定
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范
GB/T 20378.2-2006 饲料中药物残留量的测定 高效液相色谱法
GB/T 21904-2008 饲料中药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
GB/T 23533-2009 饲料中药物残留量的测定 气相色谱-质谱法

三、原理
样品经乙腈提取，经过净化后，采用高效液相色谱法进行测定。

四、仪器和设备
1. 高效液相色谱仪：具有紫外检测器和荧光检测器。
2. 恒温振荡器：可调节温度范围为室温~100℃。
3. 离心机：最高转速为10000r/min。
4. 超声波清洗器：功率为100W。

五、试剂和材料
1. 喹乙醇标准品：纯度≥98%。
2. 乙腈：色谱纯。
3. 磷酸二氢钾：分析纯。
4. 磷酸氢二钠：分析纯。
5. 氯仿：色谱纯。
6. 硅胶：色谱纯。
7. 水：离子交换纯水。
8. 饲料样品：经过粉碎、混匀后制成的样品。

六、操作步骤
1. 样品制备
取适量饲料样品，粉碎、混匀后称取1g，加入50mL乙腈，超声波处理30min，离心10min，取上清液过滤，取10mL上清液加入10mL氯仿，振荡10min，离心5min，取氯仿层，加入1g硅胶，振荡10min，离心5min，取上清液，用氮气吹干，加入1mL乙腈溶解，摇匀，过滤，取上清液备用。
2. 标准曲线的制备
取喹乙醇标准品，加入适量乙腈，制成1mg/mL的喹乙醇标准溶液，再分别取0.1、0.2、0.5、1、2、5mL标准溶液，加入10mL乙腈，摇匀，过滤，取上清液，用于制备标准曲线。
3. 色谱条件
色谱柱：C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）。
流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液（45:55）。
流速：1.0mL/min。
检测波长：280nm。
进样量：20μL。
柱温：30℃。
4. 检测
将样品和标准溶液分别进样，记录峰面积，根据标准曲线计算喹乙醇的含量。

七、计算
样品中喹乙醇的含量（mg/kg）=（样品峰面积/标准曲线斜率）×标准品加入量（mg）/样品质量（g）

八、质量控制
1. 标准曲线的制备应每次测定前制备。
2. 每个样品应重复测定3次，取平均值作为结果。
3. 每个批次样品应加入质控样品，检查分析结果的准确性和精密度。

相关标准
GB/T 601-2002 饲料中水分的测定
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GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范