巴比妥类药物是一类常用的镇静催眠药，广泛应用于人类和动物的医疗和兽药领域。然而，巴比妥类药物的滥用和误用已经引起了人们的关注。为了保障动物饲料的安全性，GB/T 23741-2009标准规定了饲料中4种巴比妥类药物的测定方法。

本标准采用高效液相色谱法和气相色谱法两种方法进行测定。其中，高效液相色谱法适用于苯巴比妥、戊巴比妥和异戊巴比妥的测定，气相色谱法适用于乙巴比妥的测定。两种方法均具有灵敏度高、准确度高、重现性好等优点。

高效液相色谱法测定苯巴比妥、戊巴比妥和异戊巴比妥的步骤如下：

1.样品制备：将饲料样品粉碎并过筛，取1g样品加入50mL离子交换水中，超声提取30min，离心10min，取上清液过滤。

2.色谱条件：色谱柱为C18柱，流动相为甲醇-水（75:25），流速为1.0mL/min，检测波长为254nm。

3.标准曲线：取苯巴比妥、戊巴比妥和异戊巴比妥的标准品，分别制备不同浓度的标准溶液，进行色谱分析，绘制标准曲线。

4.样品测定：将样品溶液进行色谱分析，根据标准曲线计算出样品中巴比妥类药物的含量。

气相色谱法测定乙巴比妥的步骤如下：

1.样品制备：将饲料样品粉碎并过筛，取1g样品加入50mL甲醇中，超声提取30min，离心10min，取上清液过滤。

2.色谱条件：色谱柱为DB-5柱，流动相为氢气，检测器为氮磷检测器。

3.标准曲线：取乙巴比妥的标准品，制备不同浓度的标准溶液，进行色谱分析，绘制标准曲线。

4.样品测定：将样品溶液进行色谱分析，根据标准曲线计算出样品中乙巴比妥的含量。

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