饲料酸化剂是一种常用的饲料添加剂，可以调节饲料的酸碱度，促进动物的消化吸收。其中柠檬酸、富马酸和乳酸是常用的饲料酸化剂成分。本标准规定了饲料酸化剂中柠檬酸、富马酸和乳酸的测定方法，采用高效液相色谱法进行测定。

1. 原理
将样品中的柠檬酸、富马酸和乳酸分离出来，通过高效液相色谱法进行定量测定。

2. 仪器和设备
（1）高效液相色谱仪
（2）色谱柱：C18色谱柱
（3）移液器、量筒、瓶塞、滤膜等

3. 试剂和材料
（1）乙腈：色谱纯
（2）磷酸二氢钾：分析纯
（3）甲醇：色谱纯
（4）超纯水
（5）柠檬酸、富马酸、乳酸标准品

4. 样品的制备
将饲料酸化剂样品称取0.5g，加入50mL超纯水中，振荡混合10min，离心10min，取上清液过滤，取1mL过滤液加入10mL瓶中，加入1mL甲醇，振荡混合10min，离心10min，取上清液过滤，即为待测样品。

5. 操作步骤
（1）色谱条件设置
流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（30:70）
流速：1.0mL/min
检测波长：210nm
柱温：30℃

（2）标准曲线的绘制
取柠檬酸、富马酸、乳酸标准品各5mL，分别加入10mL瓶中，加入1mL甲醇，振荡混合10min，离心10min，取上清液过滤，分别稀释为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mg/L的标准溶液，以0.45μm滤膜过滤，取10μL注入色谱仪进行测定，绘制标准曲线。

（3）样品的测定
取待测样品10μL注入色谱仪进行测定，根据标准曲线计算出柠檬酸、富马酸、乳酸的含量。

6. 结果的计算
样品中柠檬酸、富马酸、乳酸的含量分别计算如下：
柠檬酸含量（mg/kg）=（样品中柠檬酸峰面积/标准曲线柠檬酸峰面积）×标准曲线柠檬酸浓度×1000×稀释倍数
富马酸含量（mg/kg）=（样品中富马酸峰面积/标准曲线富马酸峰面积）×标准曲线富马酸浓度×1000×稀释倍数
乳酸含量（mg/kg）=（样品中乳酸峰面积/标准曲线乳酸峰面积）×标准曲线乳酸浓度×1000×稀释倍数

7. 精密度和准确度
在相同条件下，重复测定6次，柠檬酸、富马酸、乳酸的相对标准偏差均不大于5%。

相关标准
GB/T 6437-2017 饲料中柠檬酸含量的测定 高效液相色谱法
GB/T 6438-2017 饲料中富马酸含量的测定 高效液相色谱法
GB/T 6439-2017 饲料中乳酸含量的测定 高效液相色谱法
GB/T 6436-2017 饲料添加剂中有机酸含量的测定 高效液相色谱法
GB/T 6435-2017 饲料添加剂中有机酸含量的测定 滴定法