一、范围
本标准规定了饲料中蓖麻碱的高效液相色谱法测定方法。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格
GB/T 6688 分析化学实验室安全操作规程
GB/T 20394 饲料中蓖麻碱的测定 高效液相色谱法

三、定义
3.1 蓖麻碱：指蓖麻子中的主要毒性成分，化学名称为2-亚硝基-1-甲基-8-氨基-9,10-二氢-ergotaman-3,6,18-trione。

四、原理
样品经提取、净化后，采用高效液相色谱法进行测定。

五、仪器和设备
5.1 高效液相色谱仪：具有紫外检测器和色谱柱恒温箱。
5.2 称量仪：量程为0.1mg~200g。
5.3 超声波清洗器：功率为100W，频率为40kHz。
5.4 氮气吹扫仪：流量可调，压力为0.05MPa。

六、试剂和材料
6.1 甲醇：色谱纯。
6.2 乙腈：色谱纯。
6.3 磷酸二氢钾：分析纯。
6.4 磷酸：分析纯。
6.5 氨水：浓度为25%。
6.6 氯仿：色谱纯。
6.7 硅胶：分析纯。
6.8 蒸馏水：制备实验室纯水。
6.9 饲料样品：经过破碎、混合、分样等处理后得到的样品。

七、操作步骤
7.1 样品的制备
取饲料样品约10g，粉碎后称取1g，加入50mL氯仿，超声波清洗10min，离心分离，取上清液，加入等体积的蒸馏水，摇匀，离心分离，取上清液，过滤，取滤液1mL，加入10mL甲醇，摇匀，过滤，取滤液1mL，即为待测样品。

7.2 标准曲线的制备
取蓖麻碱标准品适量，加入甲醇中制成1mg/mL的标准溶液，再用甲醇稀释得到不同浓度的标准溶液，分别为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/mL。

7.3 色谱条件
色谱柱：C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）。
流动相：甲醇-乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液（45:45:10）。
流速：1.0mL/min。
检测波长：280nm。
柱温：30℃。

7.4 样品的测定
取待测样品1mL，加入10mL甲醇，摇匀，过滤，取滤液1mL，注入色谱柱，按照色谱条件进行分离，记录峰面积，根据标准曲线计算蓖麻碱的含量。

八、计算
样品中蓖麻碱的含量（mg/kg）=（样品中蓖麻碱的峰面积/标准曲线中相应浓度的峰面积）×标准曲线中相应浓度的蓖麻碱含量×1000/样品质量

九、质量控制
9.1 重复性：同一样品进行6次测定，相对标准偏差不大于5%。
9.2 平行测定：同一样品进行2次测定，相对标准偏差不大于5%。
9.3 加标回收率：在样品中加入已知量的蓖麻碱标准品，进行测定，回收率在80%~120%之间。

十、结果报告
报告样品中蓖麻碱的含量，保留一位小数，单位为mg/kg。

相关标准
GB/T 6682 分析化学实验室用水规格
GB/T 6688 分析化学实验室安全操作规程
GB/T 20394 饲料中蓖麻碱的测定 高效液相色谱法
GB/T 6433 饲料中氨基酸的测定
GB/T 6434 饲料中脂肪酸的测定