GB/T 25168-2010
畜禽 cDNA 文库构建与保存技术规程
发布时间:2010-09-26 实施时间:2011-03-01


畜禽 cDNA 文库是指将畜禽组织或细胞中的 mRNA 提取出来,通过反转录和 PCR 扩增等技术构建的 cDNA 文库。畜禽 cDNA 文库的构建和保存对于畜禽基因组研究具有重要意义。本标准旨在规范畜禽 cDNA 文库的构建和保存,以保证畜禽基因组研究的可靠性和准确性。

1. 质量要求
畜禽 cDNA 文库的构建应该保证以下质量要求:
(1)cDNA 库的大小应该在 1×10^6~1×10^7 个克隆之间;
(2)插入物的长度应该在 0.5~3 kb 之间;
(3)插入物的重复率应该低于 5%;
(4)插入物的杂交率应该高于 80%。

2. 构建方法
畜禽 cDNA 文库的构建方法应该包括以下步骤:
(1)提取 mRNA:从畜禽组织或细胞中提取 mRNA;
(2)反转录:利用反转录酶将 mRNA 转录成 cDNA;
(3)加头尾:在 cDNA 的 5' 和 3' 末端加上适当的头尾序列;
(4)连接载体:将 cDNA 连接到适当的载体上;
(5)转化宿主:将连接好的载体转化到适当的宿主细胞中;
(6)筛选克隆:通过筛选,得到所需的 cDNA 克隆。

3. 保存方法
畜禽 cDNA 文库的保存方法应该包括以下要求:
(1)保存温度:-80℃;
(2)保存时间:长期保存。

相关标准
GB/T 25167-2010 畜禽基因组 DNA 提取技术规程
GB/T 25169-2010 畜禽基因组 DNA 库构建与保存技术规程
GB/T 25170-2010 畜禽基因组 DNA 序列分析技术规程
GB/T 25171-2010 畜禽基因组 DNA 序列注释技术规程
GB/T 25172-2010 畜禽基因组 DNA 序列比较技术规程