维生素A是一种重要的营养素，对动物的生长发育、免疫力、视力等方面都有重要的影响。因此，在饲料中添加适量的维生素A是非常必要的。为了保证饲料中维生素A的含量符合要求，需要对饲料中维生素A的含量进行测定。本标准规定了饲料中维生素A的高效液相色谱法测定方法。

1. 原理
将饲料样品中的维生素A提取出来，经过净化处理后，采用高效液相色谱法进行测定。

2. 仪器和设备
（1）高效液相色谱仪
（2）色谱柱：C18反相色谱柱
（3）分光光度检测器
（4）移液器、量筒、瓶塞等

3. 试剂和材料
（1）甲醇：色谱纯
（2）乙腈：色谱纯
（3）正己烷：色谱纯
（4）氯仿：色谱纯
（5）乙酸乙酯：色谱纯
（6）维生素A标准品
（7）饲料样品

4. 操作步骤
（1）样品制备：取适量饲料样品，粉碎后称取1g，加入50ml正己烷，振荡提取30min，离心分离，取上清液，加入等体积氯仿，振荡提取30min，离心分离，取上清液，加入等体积乙酸乙酯，振荡提取30min，离心分离，取上清液，加入等体积水，振荡混合，离心分离，取上清液，用氮气吹干，加入2ml甲醇，振荡混合，离心分离，取上清液，即为样品提取液。
（2）色谱条件：
色谱柱：C18反相色谱柱
流动相：甲醇-乙腈（95:5）
检测波长：325nm
流速：1.0ml/min
进样量：20μl
（3）标准曲线的绘制：取维生素A标准品，分别加入适量的样品提取液中，制成不同浓度的标准溶液，用高效液相色谱法测定其峰面积，绘制标准曲线。
（4）样品测定：取适量样品提取液，用高效液相色谱法测定其峰面积，根据标准曲线计算出维生素A的含量。

5. 结果计算
维生素A的含量，按下式计算：
C=（As-A0）/a×V/m
其中，C为维生素A的含量，μg/g；
As为样品峰面积；
A0为空白峰面积；
a为标准曲线斜率；
V为样品提取液的总体积，ml；
m为样品质量，g。

相关标准
GB/T 6432-2018 饲料中维生素A的测定
GB/T 6433-2018 饲料中维生素D的测定
GB/T 6434-2018 饲料中维生素E的测定
GB/T 6435-2018 饲料中维生素K的测定
GB/T 6436-2018 饲料中维生素B1的测定