松球果锈病菌是一种危害松树的病原菌，能够引起松树的枯死和凋萎。为了防止该病菌的传播和危害，需要对松球果进行检疫鉴定。本标准就是为了规范松球果锈病菌检疫鉴定的方法而制定的。

1.范围
本标准适用于松球果锈病菌的检疫鉴定。

2.样品采集
2.1 采样时间：在松球果成熟期采集，一般为9月至10月。
2.2 采样方法：采用无菌铁钳或无菌手套将松球果采集下来，避免损伤松球果表面。
2.3 采样数量：每个样品不少于50个松球果。

3.样品处理
3.1 样品消毒：将采集的松球果放入无菌水中浸泡5分钟，然后用无菌纸巾擦干表面水分。
3.2 样品分离：将松球果表面的皮层剥离，取出内部的种子，将种子表面消毒后分离出种皮。
3.3 样品保存：将分离出的种皮放入无菌离心管中，加入无菌蒸馏水，保存在4℃冰箱中。

4.鉴定方法
4.1 培养基准备：制备PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基），加入青霉素和链霉素，灭菌后倒入无菌培养皿中。
4.2 鉴定步骤：
（1）将保存在冰箱中的样品取出，用无菌蒸馏水洗涤3次，每次洗涤5分钟。
（2）将样品放入PDA培养基上，培养温度为25℃，培养时间为7天。
（3）观察培养皿中是否有菌落生长，如有，则进行形态学鉴定。
（4）形态学鉴定：观察菌落的形态、颜色、质地等特征，进行初步鉴定。
（5）生理生化鉴定：进行生理生化试验，如氧化酶试验、卟啉试验等，进一步鉴定病原菌种类。

5.结果判定
5.1 如果在培养皿中观察到有菌落生长，且经过形态学和生理生化鉴定后确认为松球果锈病菌，则判定该样品为阳性。
5.2 如果在培养皿中未观察到菌落生长，则判定该样品为阴性。

相关标准
GB/T 31787-2015 松球果锈病菌检疫技术要求
GB/T 31789-2015 松球果锈病菌检疫处理方法
GB/T 31790-2015 松球果锈病菌检疫标准样品制备方法
GB/T 31791-2015 松球果锈病菌检疫标准样品使用方法
GB/T 31792-2015 松球果锈病菌检疫标准样品质量控制方法