维生素K3是一种重要的维生素，它在动物体内具有促进凝血、维持骨骼健康等作用。因此，在饲料中添加适量的维生素K3可以提高动物的生产性能和健康水平。为了保证饲料中维生素K3的含量符合要求，需要对其进行测定。

本标准采用高效液相色谱法测定饲料中维生素K3的含量。具体操作步骤如下：

1. 试样的制备

将饲料样品取1g，加入50mL甲醇中，超声处理10min，离心10min，取上清液过滤，取10mL上清液加入10mL水中，调节pH至7.0，用0.22μm滤膜过滤，即为试样液。

2. 标准曲线的制备

取维生素K3标准品0.1mg/mL的溶液，分别取0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，加入10mL甲醇中，制成浓度分别为0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.04mg/mL、0.06mg/mL、0.08mg/mL、0.1mg/mL的标准溶液。

3. 色谱条件

色谱柱：C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）

流动相：甲醇-水（85:15）

流速：1.0mL/min

检测波长：245nm

进样量：20μL

柱温：30℃

4. 操作步骤

（1）将试样液和标准溶液分别进样，记录峰面积。

（2）根据标准曲线计算出维生素K3的含量。

5. 结果计算

维生素K3的含量，按下式计算：

C=（As/Ak）×Ck×Vd/Vs

其中，C为维生素K3的含量（mg/kg）；As为试样峰面积；Ak为标准曲线上相应浓度的峰面积；Ck为标准品的浓度（mg/mL）；Vd为洗脱液的体积（mL）；Vs为试样液的体积（mL）。

相关标准
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