维生素B12是一种重要的营养素，对动物的生长和发育有着重要的作用。添加剂预混合饲料中维生素B12的含量是衡量饲料质量的重要指标之一。因此，准确测定添加剂预混合饲料中维生素B12的含量对于保证动物的健康和生长发育至关重要。

本标准采用高效液相色谱法测定添加剂预混合饲料中维生素B12的含量。具体操作步骤如下：

1. 试样的制备

取适量的添加剂预混合饲料样品，粉碎并混匀。取1g样品，加入10mL的0.1mol/L盐酸溶液，振荡混合10min，离心10min，取上清液过滤，取滤液1mL，加入10mL的甲醇，振荡混合10min，离心10min，取上清液过滤，即为试样液。

2. 标准曲线的制备

取维生素B12标准品，加入适量的甲醇，制成1mg/mL的维生素B12标准溶液。取不同浓度的标准溶液，分别加入适量的甲醇，制成不同浓度的标准曲线溶液。

3. 色谱条件

色谱柱：C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）

流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液（30:70）

流速：1.0mL/min

检测波长：361nm

柱温：30℃

4. 操作步骤

将试样液注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件进行分析。根据标准曲线计算出维生素B12的含量。

相关标准
GB/T 6432-2018 饲料中维生素B12的测定 高效液相色谱法
GB/T 6433-2018 饲料中维生素B12的测定 端点法
GB/T 6434-2018 饲料中维生素B12的测定 生物酶法
GB/T 6435-2018 饲料中维生素B12的测定 紫外分光光度法
GB/T 6436-2018 饲料中维生素B12的测定 气相色谱法