一、范围
本标准规定了饲料中色氨酸的测定方法。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室水和气的纯度检验方法
GB/T 6688 分析化学实验室安全规程
GB/T 6689 分析化学实验室一般要求
GB/T 16913.1 饲料中氨基酸的测定 第1部分：高效液相色谱法
GB/T 20394 饲料中色氨酸的测定

三、原理
样品经酸水解后，色氨酸与硫酸在加热下生成吡咯烷酮，再与酸性亚硝酸钠反应生成紫色化合物，经过分光光度计测定吸光度，与标准色氨酸溶液比较，计算出样品中色氨酸的含量。

四、仪器和设备
1.高效液相色谱仪
2.紫外检测器
3.恒温水浴器
4.电子天平
5.移液器
6.离心机
7.超声波清洗器
8.分光光度计

五、试剂和材料
1.色氨酸标准品
2.硫酸
3.酸性亚硝酸钠
4.氢氧化钠
5.氯化钠
6.甲醇
7.乙腈
8.去离子水

六、操作步骤
1.样品制备
取适量样品，粉碎后过筛，称取0.5g样品，加入10mL 6mol/L HCl，放入恒温水浴器中加热水解2h，冷却后加入10mL 6mol/L NaOH，用氯化钠调节pH至7-8，加入10mL 0.1mol/L酸性亚硝酸钠，放置室温下反应30min，加入10mL 6mol/L HCl，用氯化钠调节pH至2-3，加入5mL 10%硫酸，加热至沸腾，冷却后用去离子水定容至50mL，过滤，取滤液进入高效液相色谱仪进行测定。
2.色氨酸标准品制备
取适量色氨酸标准品，用甲醇或乙腈溶解，制备成1mg/mL的标准溶液。
3.仪器条件
柱：C18柱，4.6mm×250mm，5μm
流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（V/V，15:85）
流速：1.0mL/min
检测波长：280nm
进样量：20μL
4.计算
用标准曲线法计算样品中色氨酸的含量。

七、结果表示
样品中色氨酸的含量，以mg/kg表示。

八、精密度和准确度
本方法的精密度和准确度见GB/T 16913.1。

相关标准
GB/T 16913.1 饲料中氨基酸的测定 第1部分：高效液相色谱法
GB/T 20394 饲料中色氨酸的测定
GB/T 15401-2018 饲料中赖氨酸的测定
GB/T 15402-2018 饲料中苯丙氨酸的测定
GB/T 15403-2018 饲料中异亮氨酸的测定