添加剂预混合饲料是指将各种营养成分和添加剂按一定比例混合后，制成的一种饲料。其中烟酸和叶酸是常用的添加剂之一，对动物的生长和健康有着重要的作用。因此，准确测定添加剂预混合饲料中烟酸和叶酸的含量，对于保证动物的健康和生产效益具有重要意义。

本标准采用高效液相色谱法测定添加剂预混合饲料中烟酸和叶酸的含量。该方法具有灵敏度高、准确度高、重现性好等优点，适用于添加剂预混合饲料中烟酸和叶酸的测定。

具体操作步骤如下：

1.样品的制备

将添加剂预混合饲料样品取1g，加入50mL的0.1mol/L的氢氧化钠溶液中，用超声波处理器处理30min，然后加入5mL的0.1mol/L的硫酸溶液，用超声波处理器处理30min，离心10min，取上清液过滤，取滤液10mL，加入10mL的甲醇，振荡均匀，过滤，取滤液5mL，即为样品。

2.标准曲线的制备

分别取烟酸和叶酸的标准品，加入甲醇中制成1mg/mL的标准溶液，再分别稀释成0.1mg/mL、0.01mg/mL、0.001mg/mL、0.0001mg/mL的标准溶液，用高效液相色谱法测定各浓度下的峰面积，绘制标准曲线。

3.样品的测定

将样品取5mL，加入10mL的甲醇，振荡均匀，过滤，取滤液1mL，注入高效液相色谱仪中，测定峰面积，根据标准曲线计算出烟酸和叶酸的含量。

相关标准
GB/T 6437-2017 动物饲料中烟酸的测定 高效液相色谱法
GB/T 6438-2017 动物饲料中叶酸的测定 高效液相色谱法
GB/T 6439-2017 动物饲料中维生素B12的测定 高效液相色谱法
GB/T 17814-2018 添加剂预混合饲料中维生素B12的测定 高效液相色谱法
GB/T 22223-2008 饲料中维生素C的测定 高效液相色谱法