GB/T 36835-2018
欧洲山萝卜检疫鉴定方法
发布时间:2018-09-17 实施时间:2019-04-01


欧洲山萝卜是一种外来入侵物种,对我国的生态环境和农业生产造成了严重的威胁。为了及时发现和控制山萝卜的扩散,保护我国的生态环境和农业生产,制定本标准。

1.范围
本标准适用于欧洲山萝卜的检疫鉴定。

2.样品采集
2.1 样品采集时间
样品采集时间应在山萝卜生长期内进行,一般为4月至10月。
2.2 样品采集地点
样品采集地点应为可能存在山萝卜的地区,如农田、荒地、道路两侧等。
2.3 样品采集方法
样品采集应采用随机取样的方法,每个样品应包括根、茎、叶三部分,每部分应采集3-5个样本,合计9-15个样本。样品应放入密封袋中,标明采样时间、地点和编号。

3.检测方法
3.1 样品处理
将样品中的杂质去除后,将样品切碎成小块,加入适量的蒸馏水,用搅拌器搅拌均匀,过滤后取上清液备用。
3.2 PCR扩增
将上清液加入PCR反应管中,加入PCR扩增试剂盒中的PCR反应液,进行PCR扩增。PCR扩增条件为:95℃预变性5min,95℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸30s,共35个循环,72℃延伸10min,4℃保持。
3.3 电泳检测
将PCR扩增产物进行电泳检测,检测结果应为阴性。

4.结果判定
4.1 PCR扩增结果
PCR扩增结果为阳性时,应进行二次PCR扩增,再次进行电泳检测。若二次PCR扩增结果为阳性,则判定为山萝卜阳性。
4.2 结果判定标准
若样品中任意一部分检测结果为阳性,则判定为山萝卜阳性。

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