饲料中总磷的测定是饲料分析中的一个重要指标，对于饲料的营养价值评价和饲料配方设计具有重要意义。本标准采用分光光度法测定饲料中总磷含量，具有操作简便、准确度高、重现性好等优点。

1. 原理
将饲料样品经过预处理后，加入含有酸性介质和还原剂的试剂，使饲料中的总磷转化为磷酸盐，然后用钼酸铵试剂与磷酸盐反应生成黄色复合物，根据复合物的吸光度值测定饲料中总磷的含量。

2. 试剂和仪器
2.1 试剂
（1）硝酸（HNO3）：纯度为65%。
（2）过氧化氢（H2O2）：纯度为30%。
（3）硫酸（H2SO4）：纯度为98%。
（4）钼酸铵（（NH4）6Mo7O24·4H2O）：纯度为99%。
（5）还原剂：硫代硫酸钠（Na2S2O3）。
（6）标准磷酸二氢钾（KH2PO4）。
（7）蒸馏水。

2.2 仪器
（1）分光光度计：波长范围为400~800nm，分辨率为1nm。
（2）电热板：可调温度范围为0~100℃。
（3）恒温水浴：可调温度范围为0~100℃。

3. 样品的制备
将饲料样品研磨成粉末，取适量样品称入烘干后称重的烧杯中，加入10mL的硝酸和2mL的过氧化氢，加热至样品完全溶解，再加入2mL的硫酸，继续加热至样品变为深棕色，冷却后加入50mL的蒸馏水，用蒸馏水定容至100mL，摇匀后过滤，取滤液作为测定样品。

4. 操作步骤
4.1 标准曲线的绘制
取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL的标准磷酸二氢钾溶液，分别加入烧杯中，加入10mL的试剂，按照3中的样品制备方法进行处理，用蒸馏水定容至100mL，摇匀后过滤，取滤液分别测定吸光度值，绘制标准曲线。

4.2 样品的测定
取适量的样品，按照3中的样品制备方法进行处理，用蒸馏水定容至100mL，摇匀后过滤，取滤液测定吸光度值，根据标准曲线计算出样品中总磷的含量。

5. 结果的计算
样品中总磷的含量（mg/kg）=（样品吸光度值-空白吸光度值）×标准曲线斜率×1000/样品的质量（g）

6. 结果的表示
结果应保留两位小数，单位为mg/kg。

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