草鱼呼肠孤病毒是一种常见的鱼类病毒，能够引起草鱼等鱼类的呼吸道和肠道疾病。为了保障水产品的质量安全，需要对草鱼呼肠孤病毒进行检测。本标准提供了一种可靠的草鱼呼肠孤病毒三重RT-PCR检测方法。

1.样品处理
样品处理是草鱼呼肠孤病毒检测的第一步。样品可以是草鱼的鳃、肝、肾、脾、肌肉等组织，也可以是水、沉积物等环境样品。样品处理包括样品的收集、保存、处理等步骤。样品收集时应注意避免污染，保存时应冷冻保存或加入RNA保护剂，处理时应先进行组织匀浆或沉淀等步骤。

2.RNA提取
RNA提取是草鱼呼肠孤病毒检测的关键步骤。RNA提取的质量直接影响到后续RT-PCR扩增的结果。RNA提取可以采用商用RNA提取试剂盒或自制试剂进行。RNA提取前应注意避免污染，提取后应进行纯度和浓度的检测。

3.RT-PCR扩增
RT-PCR扩增是草鱼呼肠孤病毒检测的核心步骤。本标准采用三重RT-PCR扩增方法，包括草鱼呼肠孤病毒的外壳蛋白VP2基因、内壳蛋白VP1基因和RNA依赖性RNA聚合酶基因的扩增。RT-PCR扩增前应进行反转录酶的活性检测和PCR试剂的质量检测。扩增后应进行凝胶电泳和测序验证。

4.检测结果判定
检测结果判定是草鱼呼肠孤病毒检测的最后一步。根据RT-PCR扩增的结果，可以判断样品中是否存在草鱼呼肠孤病毒。本标准采用荧光定量PCR方法进行检测结果的判定。

相关标准
GB/T 37745-2019 水产品中草鱼呼肠孤病毒检测方法
GB/T 37744-2019 水产品中病毒检测方法
GB/T 37743-2019 水产品中细菌检测方法
GB/T 37742-2019 水产品中寄生虫检测方法
GB/T 37741-2019 水产品中毒素检测方法