猪链球菌2型是一种常见的猪源性病原菌,能引起猪链球菌病,严重影响猪的生产和养殖。为了及时、准确地检测猪链球菌2型,保障猪的健康和生产安全,制定了本标准。
1.要求
本标准适用于猪链球菌2型荧光PCR检测方法的研究和实验室检测。检测结果应准确、可靠、重复性好。
2.试剂
2.1 猪链球菌2型荧光PCR检测试剂盒:包括PCR反应液、阳性对照品、负性对照品等。
2.2 DNA提取试剂盒:包括细胞裂解液、蛋白酶K、洗涤缓冲液等。
3.仪器设备
3.1 PCR仪
3.2 荧光定量PCR仪
3.3 生物安全柜
3.4 离心机
3.5 电泳仪
4.操作程序
4.1 样品采集:采集猪鼻腔分泌物、肺部组织等样品。
4.2 DNA提取:使用DNA提取试剂盒提取样品DNA。
4.3 PCR反应:将提取的DNA加入PCR反应液中,进行PCR扩增。
4.4 荧光定量PCR:将PCR产物加入荧光定量PCR仪中,进行荧光定量PCR检测。
4.5 结果判定:根据荧光定量PCR仪的结果,判断样品是否为猪链球菌2型阳性。
5.结果判定
5.1 阳性判定:荧光定量PCR仪检测结果中,猪链球菌2型荧光信号值大于等于阳性对照品荧光信号值的2倍,且荧光信号曲线呈S型。
5.2 阴性判定:荧光定量PCR仪检测结果中,猪链球菌2型荧光信号值小于等于负性对照品荧光信号值的2倍。
6.质量控制
6.1 试剂质量控制:使用符合要求的试剂盒。
6.2 操作质量控制:操作人员应具备PCR技术操作经验,操作过程中应注意无菌操作。
6.3 结果质量控制:每批次检测应包括阳性对照品和负性对照品,确保检测结果准确可靠。
相关标准
GB/T 19915.1-2005 猪链球菌1型荧光PCR检测方法
GB/T 19915.2-2005 猪链球菌3型荧光PCR检测方法
GB/T 19915.3-2005 猪链球菌4型荧光PCR检测方法
GB/T 19915.4-2005 猪链球菌5型荧光PCR检测方法
GB/T 19915.5-2005 猪链球菌6型荧光PCR检测方法