犬细小病毒是一种常见的犬病毒，可引起犬的呼吸道、消化道等疾病。犬细小病毒的基因分型研究对于疫苗研发、病毒流行病学调查等具有重要意义。本标准规定了犬细小病毒基因分型方法，包括PCR扩增、序列分析等步骤。

1. 样品采集
从犬的鼻咽部、口腔、肛门等部位采集样品，将样品置于离心管中，加入等体积的磷酸盐缓冲液，混匀后离心收集上清液，即为样品。

2. RNA提取
使用RNA提取试剂盒提取样品中的RNA，按照试剂盒说明书进行操作。

3. PCR扩增
使用犬细小病毒特异性引物对RNA进行PCR扩增，PCR反应体系为25μL，包括10×PCR缓冲液2.5μL、2.5mM dNTPs混合液1μL、10μM引物混合液1μL、RNA模板2μL、Taq DNA聚合酶0.25μL、ddH2O至25μL。PCR反应条件为：95℃预变性5min，95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，共35个循环。PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳检测，观察PCR产物大小和纯度。

4. PCR产物纯化
使用PCR产物纯化试剂盒对PCR产物进行纯化，按照试剂盒说明书进行操作。

5. 序列分析
将PCR产物送至测序公司进行测序，获得序列后进行序列比对和分析，确定犬细小病毒的基因型。

相关标准
GB/T 34747-2017 犬细小病毒病毒学检测方法
GB/T 34748-2017 犬细小病毒疫苗质量控制方法
GB/T 34749-2017 犬细小病毒病毒学检测质量控制方法
GB/T 34750-2017 犬细小病毒疫苗免疫效力检测方法
GB/T 34751-2017 犬细小病毒疫苗免疫效力检测质量控制方法