动物流感是一种由动物流感病毒引起的疾病，可感染多种动物，包括家禽、野生鸟类、猪等。其中，H7N9亚型流感病毒是一种新型的禽流感病毒，自2013年首次发现以来，已经引起了全球的关注。为了及时发现和控制动物流感病毒的传播，需要建立一种快速、准确、灵敏的检测方法。

本标准提供了一种双重荧光RT-PCR检测方法，该方法可以同时检测H7N9亚型流感病毒的两个基因片段，具有高度的特异性和灵敏度。该方法的主要步骤包括：提取样品RNA、合成cDNA、PCR扩增、荧光探针检测等。

具体操作步骤如下：

1. 样品处理：将样品（如鸟粪、鸟嘴、鸟肺、鸟血等）加入适量的PBS缓冲液中，进行离心沉淀，收集上清液。

2. RNA提取：使用RNA提取试剂盒提取样品中的总RNA。

3. cDNA合成：使用逆转录酶将RNA转录成cDNA。

4. PCR扩增：使用特异性引物扩增H7N9亚型流感病毒的两个基因片段。

5. 荧光探针检测：使用荧光探针检测PCR产物，判断是否存在H7N9亚型流感病毒。

本标准要求检测结果的灵敏度应达到10个拷贝数/μL，特异性应达到100%。同时，还要求在检测过程中应采取严格的质量控制措施，确保检测结果的准确性和可靠性。

相关标准
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