动物狂犬病是一种由狂犬病病毒引起的急性传染病，对人和动物的危害极大。因此，对于动物狂犬病的检测非常重要。本标准规定了动物狂犬病病毒核酸检测方法，包括PCR和实时荧光定量PCR两种方法。

1. PCR方法
PCR方法是一种常用的核酸检测方法，其基本原理是利用DNA聚合酶在一定条件下，对DNA模板进行多轮扩增，从而获得足够的DNA产物。本标准中的PCR方法包括以下步骤：

1.1 样品处理
将样品进行处理，提取其中的核酸。

1.2 PCR反应
将提取的核酸作为模板，进行PCR反应。PCR反应的条件和步骤如下：

反应体系：
模板DNA 2 μL
10×PCR缓冲液 2.5 μL
2.5 mM dNTPs混合液 2 μL
10 μM引物混合液 1 μL
Taq DNA聚合酶 0.25 μL
去离子水 17.25 μL
总体积 25 μL

PCR反应条件：
预变性 95℃ 5 min
循环扩增 95℃ 30 s
55℃ 30 s
72℃ 30 s
共35个循环
最终延伸 72℃ 10 min
保温 4℃

1.3 电泳检测
将PCR产物进行电泳检测，判断是否存在目标DNA。

2. 实时荧光定量PCR方法
实时荧光定量PCR方法是一种高灵敏度、高特异性的核酸检测方法，其基本原理是利用荧光探针在PCR反应过程中与扩增产物结合，从而实现实时监测PCR反应的进程。本标准中的实时荧光定量PCR方法包括以下步骤：

2.1 标准曲线制备
制备一系列已知浓度的阳性对照，分别进行PCR扩增，得到一系列浓度不同的PCR产物。将这些PCR产物进行定量，制备出一条标准曲线。

2.2 样品处理
将样品进行处理，提取其中的核酸。

2.3 实时荧光定量PCR反应
将提取的核酸作为模板，进行实时荧光定量PCR反应。实时荧光定量PCR反应的条件和步骤如下：

反应体系：
模板DNA 2 μL
2×PCR Master Mix 12.5 μL
10 μM引物混合液 1 μL
10 μM探针 0.5 μL
去离子水 8 μL
总体积 25 μL

实时荧光定量PCR反应条件：
预变性 95℃ 5 min
循环扩增 95℃ 10 s
55℃ 30 s
共40个循环

2.4 数据分析
根据标准曲线，计算出样品中目标DNA的浓度。

3. 质量控制
为了保证检测结果的准确性和可靠性，本标准中规定了以下质量控制要求：

3.1 阳性对照
每次检测都应该加入阳性对照，以确保PCR反应的可靠性。

3.2 负性对照
每次检测都应该加入负性对照，以排除假阳性的可能性。

3.3 检测限
本标准中规定了检测限，即最低可检测到的病毒核酸浓度。

4. 性能评价
为了评价本标准中的检测方法的性能，本标准中规定了以下性能指标：

4.1 特异性
检测方法对非目标病毒核酸的特异性。

4.2 灵敏度
检测方法对目标病毒核酸的灵敏度。

4.3 准确性
检测方法的准确性。

4.4 重复性
同一实验室内，不同操作者、不同时间、不同试剂盒、不同仪器之间的重复性。

4.5 稳定性
试剂盒的稳定性。

相关标准
GB/T 36790-2018 动物狂犬病病毒抗体检测方法
GB/T 36791-2018 动物狂犬病疫苗效价测定方法
GB/T 36792-2018 动物狂犬病疫苗质量控制方法
GB/T 36793-2018 动物狂犬病疫苗接种程序和技术要求
GB/T 36794-2018 动物狂犬病疫苗不良反应监测方法