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一、范围
本标准适用于生化制品中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定。

二、引用标准
GB/T 601-2002 化学试剂分装方法
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价
GB/T 8170-2008 数字表示法和圆整规则
GB/T 12528-2008 液体色谱分析通用术语
GB/T 17854-1999 液体色谱分析中色谱柱的选择和使用

三、原理
样品经加热酸解后，经过蛋白质去除、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的分离和测定，采用液相色谱示差折光法测定葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的含量。

四、仪器和设备
1.高效液相色谱仪
2.示差折光检测器
3.色谱柱：C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）
4.恒温器
5.移液器
6.瓶塞
7.量筒
8.烧杯
9.离心机

五、试剂和材料
1.葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准品
2.甲醇
3.乙腈
4.去离子水
5.硫酸
6.氯化钠
7.氯仿
8.氯仿-甲醇（1:1，V/V）
9.氯仿-甲醇-去离子水（10:10:1，V/V/V）
10.氯仿-甲醇-去离子水（10:10:5，V/V/V）
11.氯仿-甲醇-去离子水（10:10:10，V/V/V）

六、样品处理
1.取适量样品，加入5%硫酸溶液，加热酸解，冷却至室温。
2.加入氯化钠，离心，取上清液。
3.加入氯仿，振荡混合，离心，取有机相。
4.加入甲醇，振荡混合，离心，取上清液。
5.加入氯仿-甲醇（1:1，V/V），振荡混合，离心，取有机相。
6.加入氯仿-甲醇-去离子水（10:10:1，V/V/V），振荡混合，离心，取有机相。
7.加入氯仿-甲醇-去离子水（10:10:5，V/V/V），振荡混合，离心，取有机相。
8.加入氯仿-甲醇-去离子水（10:10:10，V/V/V），振荡混合，离心，取有机相。
9.将有机相转移至烧杯中，用氮气吹干，加入去离子水，溶解后转移至移液管中，即可进行液相色谱分析。

七、操作步骤
1.开机预热，检查仪器状态。
2.调节流速，使得葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的峰分离良好。
3.进行空白试验，记录示差折光检测器的基线。
4.进行标准曲线试验，记录葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的峰面积和浓度。
5.进行样品测定，记录葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的峰面积。
6.计算样品中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的含量。

八、计算方法
1.标准曲线的制备和计算方法
取一定浓度的葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准品，按照样品处理方法进行处理，进行液相色谱分析，记录峰面积和浓度，制作标准曲线。
2.样品中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的含量计算方法
样品中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的含量，根据标准曲线计算得出。

九、结果表示
样品中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的含量，以质量分数表示，保留两位小数。

十、精密度和准确度
1.精密度：同一样品进行6次测定，相对标准偏差不大于5%。
2.准确度：加入已知浓度的葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准品，进行回收率试验，回收率在98%~102%之间。

相关标准：
GB/T 601-2002 化学试剂分装方法
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价
GB/T 8170-2008 数字表示法和圆整规则
GB/T 12528-2008 液体色谱分析通用术语
GB/T 17854-1999 液体色谱分析中色谱柱的选择和使用