蛋白酶K是一种常用的蛋白酶，广泛应用于生物学、生物化学、分子生物学等领域。蛋白酶K酶活力及杂质检测方法是保证蛋白酶K质量的重要手段。本标准规定了蛋白酶K酶活力及杂质检测方法，以保证蛋白酶K的质量。

1. 蛋白酶K酶活力检测方法
1.1 原理
蛋白酶K酶活力检测方法采用酶促反应原理，通过测定酶解底物的速率来计算酶活力。

1.2 试剂和仪器
1.2.1 试剂
（1）蛋白酶K标准品
（2）酶解底物
（3）缓冲液

1.2.2 仪器
（1）分光光度计
（2）恒温水浴

1.3 操作步骤
1.3.1 制备酶解底物
将酶解底物按照说明书制备。

1.3.2 制备蛋白酶K标准品
将蛋白酶K标准品按照说明书制备。

1.3.3 测定酶活力
（1）将一定浓度的蛋白酶K标准品加入一定浓度的酶解底物中，混匀后放入恒温水浴中。
（2）在一定时间内，取出一定量的反应液，加入停止液停止反应。
（3）测定反应液的吸光度，计算酶活力。

2. 蛋白酶K杂质检测方法
2.1 原理
蛋白酶K杂质检测方法采用高效液相色谱法，通过检测蛋白酶K中的杂质来判断蛋白酶K的纯度。

2.2 试剂和仪器
2.2.1 试剂
（1）蛋白酶K样品
（2）高效液相色谱柱
（3）流动相

2.2.2 仪器
（1）高效液相色谱仪
（2）色谱柱热箱

2.3 操作步骤
2.3.1 样品制备
将蛋白酶K样品按照说明书制备。

2.3.2 色谱条件
（1）色谱柱：C18柱
（2）流动相：甲醇-水（含0.1% TFA），梯度洗脱
（3）流速：1.0 mL/min
（4）检测波长：214 nm

2.3.3 检测样品
将样品注入高效液相色谱仪中，按照色谱条件进行检测。

相关标准
GB/T 34801-2017 蛋白酶K的技术要求
GB/T 34802-2017 蛋白酶K的包装、标志、运输和贮存
GB/T 34803-2017 蛋白酶K的使用方法
GB/T 34804-2017 蛋白酶K的安全技术要求
GB/T 34805-2017 蛋白酶K的质量控制方法