壳聚糖是一种天然高分子化合物，广泛应用于医药、食品、化妆品等领域。壳聚糖的含量测定是对其质量的重要评价指标之一。本标准提供了一种高效液相色谱法，用于壳聚糖含量的测定。

1.范围
本标准规定了壳聚糖含量测定的高效液相色谱法。

2.引用标准
GB/T 601-2019 化学试剂通用规范
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范
GB/T 8170-2008 数字表示法和圆整规则
GB/T 12528-2017 化学试剂标志、包装、运输及贮存
GB/T 17814-2017 化学试剂包装标志

3.原理
将壳聚糖样品经过酸水解后，得到葡萄糖和壳寡糖，再通过高效液相色谱法进行分离和检测，根据峰面积比计算出壳聚糖的含量。

4.仪器和设备
4.1 高效液相色谱仪
4.2 色谱柱：C18色谱柱
4.3 称量仪
4.4 超声波清洗仪
4.5 离心机

5.试剂和材料
5.1 甲醇：色谱纯
5.2 乙腈：色谱纯
5.3 磷酸二氢钾：分析纯
5.4 磷酸氢二钠：分析纯
5.5 葡萄糖：分析纯
5.6 壳寡糖：分析纯
5.7 壳聚糖样品

6.操作步骤
6.1 样品制备
将壳聚糖样品加入1mol/L HCl中，加热水浴回流2h，冷却至室温，加入等体积的NaOH溶液中和，加入等体积的乙醇沉淀，离心收集沉淀，用甲醇洗涤沉淀，离心干燥，称取适量的样品，加入磷酸二氢钾溶液水解，加入磷酸氢二钠溶液中和，用超声波清洗仪清洗，离心收集上清液，过滤，取上清液进行检测。
6.2 色谱条件
流动相：甲醇-乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（30:30:40）
流速：1.0mL/min
柱温：30℃
检测波长：210nm
进样量：10μL
6.3 标准曲线的绘制
取不同浓度的壳聚糖标准品，按照上述方法进行检测，绘制壳聚糖峰面积与浓度的标准曲线。
6.4 样品检测
取样品上清液，按照上述方法进行检测，根据标准曲线计算出壳聚糖的含量。

7.结果计算
壳聚糖的含量计算公式为：
含量（%）=（样品峰面积/标准曲线斜率）×100/样品质量

8.精密度和准确度
8.1 精密度
在同一实验室内，重复进行6次测定，计算相对标准偏差（RSD），RSD不应大于2.0%。
8.2 准确度
将已知浓度的壳聚糖标准品加入样品中，按照上述方法进行检测，计算回收率，回收率应在95%~105%之间。

相关标准
GB/T 601-2019 化学试剂通用规范
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范
GB/T 8170-2008 数字表示法和圆整规则
GB/T 12528-2017 化学试剂标志、包装、运输及贮存
GB/T 17814-2017 化学试剂包装标志