脱氧核糖核酸酶I（EcoRI）是一种常用的限制性内切酶，广泛应用于分子生物学领域。酶活及杂质检测是EcoRI酶制备和应用过程中的重要环节，对于保证实验结果的准确性和可重复性具有重要意义。

本标准主要包括EcoRI酶活测定和杂质检测两部分内容。

一、EcoRI酶活测定

1. 原理

EcoRI酶活测定采用DNA凝胶电泳方法，通过观察DNA凝胶电泳图谱上的DNA切割情况来判断EcoRI酶的酶活。

2. 试剂和仪器

试剂：EcoRI酶、DNA、TAE缓冲液、乙酰胺、乙醇、蒸馏水等。

仪器：电泳仪、紫外线照射器、电泳槽、恒温水浴等。

3. 操作步骤

（1）制备DNA样品：将DNA样品加入TAE缓冲液中，加入适量的EcoRI酶，恒温反应一定时间后，加入适量的乙酰胺停止反应。

（2）电泳：将反应液加入电泳槽中，进行电泳，电泳结束后用紫外线照射器观察DNA凝胶电泳图谱。

（3）结果判定：根据DNA凝胶电泳图谱上的DNA切割情况来判断EcoRI酶的酶活。

二、杂质检测

1. 原理

杂质检测采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，通过观察DNA凝胶电泳图谱上的杂质情况来判断EcoRI酶制备的纯度。

2. 试剂和仪器

试剂：EcoRI酶、DNA、TAE缓冲液、乙酰胺、乙醇、蒸馏水等。

仪器：电泳仪、紫外线照射器、电泳槽、恒温水浴等。

3. 操作步骤

（1）制备DNA样品：将DNA样品加入TAE缓冲液中，加入适量的EcoRI酶，恒温反应一定时间后，加入适量的乙酰胺停止反应。

（2）电泳：将反应液加入电泳槽中，进行电泳，电泳结束后用紫外线照射器观察DNA凝胶电泳图谱。

（3）结果判定：根据DNA凝胶电泳图谱上的杂质情况来判断EcoRI酶制备的纯度。

相关标准
GB/T 41713-2022 脱氧核糖核酸酶I 酶制备方法
GB/T 41714-2022 脱氧核糖核酸酶I 酶储存条件
GB/T 41715-2022 脱氧核糖核酸酶I 酶应用指南
GB/T 41716-2022 分子生物学实验室通用试剂和仪器设备的质量控制要求
GB/T 41717-2022 分子生物学实验室通用试剂和仪器设备的使用规范